PRACTICA3: DETERMINACION DE LA GLUCEMIA POR EL METODO DE LA HEXOKINASA.

PRACTICA NUMERO 3

5/10/2017

OBJETIVOS:

Realizar una determinación de glucosa por el método de la hexoquinasa.

UTILIDAD CLINICA:

La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del organismo; la insulina facilita la entrada de glucosa en las células.
La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una hiperglucemia causada por un déficit de insulina.
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

FUNDAMENTOS:

La hexoquinasa cataliza la fosforilacion de la glucosa por ATP a glucosa-6-fosfato. La glucosa-6-fosfato originada es reducida a 6-fosfogluconato en presencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa con reducción paralela de NAD a NADH.
El aumento en la concentración de NADH en el medio es proporcional a la concentración de glucosa presente en la muestra ensayada.

APARATAJE:

-Espectofotometro:
Ya he hablado anteriormente sobre el espectofotometro.

MATERIALES:

-Cubetas de espectofotometria.

-Eppendorf.

-Gradilla.

-Pipetas automaticas.

-Pipeta pasteur.

REACTIVOS:

R1: Tampón ( TRIS pH 7.5,ATP, Mg )

R2: Enzimas ( NAD, Hexoquinasa, Glucosa-6-fosfato

GLUCOSE CAL (Calibrador primario de glucosa)

PROCEDIMIENTO:

1.Se prepara el reactivo RT, para ello se debe disolver el contenido del vial R2 enzimas en el vial R1 Tampon.

2.Mezclar suavemente hasta disolver su contenido.

3.Para la preparacion de la muestra, se utiliza un eppendorf donde se introducira 10 microlitros de orina.

4.Luego prepraramos 3 eppendorf para el blanco, patron y muestra.

              Blanco: 1 ml de RT 

              Patron:  1 ml de RT + 10 microlitros de patron 

              Muestra: 1ml de RT + 10 microlitros de muestra.

5.Los tres eppendorf se introducen en la estufa a 37ºC durante 5 min.

6.En el espectofotometro leer la aborbancia del patron y la muestra frente al blanco de reactivo.

RESULTADOS:

-Muestra: 0.300 mg/dl.

-Patron: 0.402 mg/dl.

*Despues se realiza el siguiente calculo:

          (0.3/0.402)·100= 74.62 ml/dl.

    

OBSERVACIONES:

-Conservacion:

   Todos los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad a una temperatura de 2 -8º C.

   Si se quiere conservar el RT, en nevera un mes a 2-8ºC o 7 dias a temperatura ambiente.