PRACTICA 4: DETERMINACION DE LA GLUCEMIA POR EL METODO DE LA OXIDASA-PEROXIDASA.
PRACTICA NUMERO 4
OBJETIVOS:
Poder cuantificar mediante el método de la exodasa-peroxidasa la glucemia.
UTILIDAD CLÍNICA:
Igual que en la practica numero 3.
FUNDAMENTOS:
La glucosa oxidasa cataliza la oxidación de glucosa a ácido gluconico. El peroxido de hidrógeno, producido se detecta mediante un aceptor cromogenico de oxigeno, fenol-empirona en presencia de peroxidasa.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de glucosa presente en la muestra ensayada.
APARATAJE:
-Espectofotometro:
Lo he explicado en la practica numero 1.
MATERIALES:
-Cubetas de espectofotometria.
-Eppendorf.
-Gradilla.
-Pipetas automaticas.
-Pipeta pasteur.
REACTIVOS:
R1: Tampón ( TRIS pH 7.4, Fenol)
R2: Enzimas ( Glucosa oxidasa, peroxidasa, 4-aminofenazona)
GLUCOSE CAL (Patron primario acuoso en glucosa)
PROCEDIMIENTO:
1.Se prepara el reactivo RT, para ello se debe disolver el contenido del vial R2 enzimas en el vial R1 Tampon.
2.Mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
3.Para la preparacion de la muestra, se utiliza un eppendorf donde se introducira 10 microlitros de orina.
4.Luego prepraramos 3 eppendorf para el blanco, patron y muestra.
Blanco: 1 ml de RT
Patron: 1 ml de RT + 10 microlitros de patron
Muestra: 1ml de RT + 10 microlitros de muestra.
5.Los tres eppendorf se introducen en la estufa a 37ºC durante 10 min.
6.En el espectofotometro leer la aborbancia del patron y la muestra frente al blanco de reactivo.
RESULTADOS:
-Muestra: 0.284 mg/dl.
-Patron: 0.339 mg/dl.
*Despues se realiza el siguiente calculo:
(0.284/0.339)·100= 83.77 ml/dl de glucosa en la muestra.
OBSERVACIONES:
-Conservacion:
Todos los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad a una temperatura de 2 -8º C.
Si se quiere conservar el RT, en nevera un mes a 2-8ºC o 7 dias a temperatura ambiente.
05/10/2017
Poder cuantificar mediante el método de la exodasa-peroxidasa la glucemia.
UTILIDAD CLÍNICA:
Igual que en la practica numero 3.
FUNDAMENTOS:
La glucosa oxidasa cataliza la oxidación de glucosa a ácido gluconico. El peroxido de hidrógeno, producido se detecta mediante un aceptor cromogenico de oxigeno, fenol-empirona en presencia de peroxidasa.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de glucosa presente en la muestra ensayada.
APARATAJE:
-Espectofotometro:
Lo he explicado en la practica numero 1.
MATERIALES:
-Cubetas de espectofotometria.
-Eppendorf.
-Gradilla.
-Pipetas automaticas.
-Pipeta pasteur.
REACTIVOS:
R1: Tampón ( TRIS pH 7.4, Fenol)
R2: Enzimas ( Glucosa oxidasa, peroxidasa, 4-aminofenazona)
GLUCOSE CAL (Patron primario acuoso en glucosa)
PROCEDIMIENTO:
1.Se prepara el reactivo RT, para ello se debe disolver el contenido del vial R2 enzimas en el vial R1 Tampon.
2.Mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
3.Para la preparacion de la muestra, se utiliza un eppendorf donde se introducira 10 microlitros de orina.
4.Luego prepraramos 3 eppendorf para el blanco, patron y muestra.
Blanco: 1 ml de RT
Patron: 1 ml de RT + 10 microlitros de patron
Muestra: 1ml de RT + 10 microlitros de muestra.
5.Los tres eppendorf se introducen en la estufa a 37ºC durante 10 min.
6.En el espectofotometro leer la aborbancia del patron y la muestra frente al blanco de reactivo.
RESULTADOS:
-Muestra: 0.284 mg/dl.
-Patron: 0.339 mg/dl.
*Despues se realiza el siguiente calculo:
(0.284/0.339)·100= 83.77 ml/dl de glucosa en la muestra.
OBSERVACIONES:
-Conservacion:
Todos los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad a una temperatura de 2 -8º C.
Si se quiere conservar el RT, en nevera un mes a 2-8ºC o 7 dias a temperatura ambiente.
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