PRACTICA 10: DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES POR EL METODO DE BIURET.

PRACTICA NUMERO 10

22/11/2017

OBJETIVOS:

Poder determinar las proteínas totales por el método de biuret.

UTILIDAD CLÍNICA:

Su determinación es útil para la detección de:

-Hiperproteinas producida por hemoconcentracion, deshidratacion o aumento en la concentración de proteínas especificas.

-Hipoproteinemia por hemodilucion debida a un defecto en la síntesis proteica, perdidas excesivas o catabolismo proteico excesivo.

FUNDAMENTOS:

En medio alcalino, las proteínas dan un intenso color violeta azulado en presencia de sales de cobre, contiene yoduro como antioxidante.

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de proteína total en la muestra ensayada.

APARATAJE:

Espectrofotometro:

Ya he explicado su utilidad en la practica numero 1.

MATERIALES:

-Cubetas de espectrofotometria.

-Pipetas automáticas.

-Muestra de suero.

-Tubos de ensayo.

REACTIVOS:

-R Biuret.

-T Protein Cal: patrón primario de Albumina Bovina.

PROCEDIMIENTO:

1.Pipetear en tres tubos :

    Patrón: 1 ml de R + 25 microlitros de patrón.

    Muestra: 1 ml de R + 25 microlitros de muestra.

    Blanco: 1 ml de R.

2.Introducir los tubos en el baño maría durante 5 minutos a 37ºC.

3.Leer en el espectrofotometro a 540 nm.

RESULTADOS:

  Absorbancias: Blanco 0, Muestra 0.431, Patrón 0.555.

*Cálculos:

(0.431/0.555) x 7 = 5.436 g/dl de proteínas totales.

OBSERVACIONES:

El color de la muestra y patrón es estable durante 30 minutos.