PRACTICA 1:CONSTRUCCION DE UNA CURVA DE CALIBRACION Y MANEJO DEL ESPECTROFOTOMETRO

PRACTICA NUMERO 1

 20-09-17

OBJETIVOS:

Elaborar dos colorantes como analitos con capacidad cromogena para elaborar sendas baterias de dilucion seriada.

Con ellas realizaremos medidas espectrofotometricas, elaborando una curva de calibracion y calcular las concentracion de los tubos.

UTILIDAD CLÍNICA:

Se busca la longitud de onda adecuada para una sustancia determinada.

FUNDAMENTOS:

Cuando un haz de luz incide sobre una muestra problema, esta absorbe radiación de una determinada longitud de onda ( color absorbido); el resto serán transmitidas y aparecerá a la vista un color que sera la suma de las longitudes de onda que no han sido absorbidas, a este color se le denomina complementario.

APARATAJE:

Espectofotometro:
Es un instrumento con el que se apoya la espectofotometria para medir la cantidad de intensidad de luz absorbida después de pasar a través de una disolución problema.
Esta formado por:
-Una fuente de energía radiante.
-Rejillas.
-Sistema selector de longitud de onda.
-Cubetas.
-Detectores de energía radiante.
-Medidores-presentadores de datos.

MATERIALES:

 -Erlenmeyer con cromogeno 1 de concentración 800 mg/dl.

 -Erlenmeyer con cromogeno 2, de concentración 600 mg/dl.

 -Agua destilada.

 -Pipetas manuales y automaticas.

 -Tubos de ensayo.

 -Cubetas de espectrofotometria.

 -Espectofotometro de absorcion.

REACTIVOS:

PROCEDIMIENTO:

Primer erlenmeyer con cromogeno a una concentracion de 800 mg/dl.

1.Colocamos en una gradilla 5 tubos con 4 ml de agua destilada cada uno.

2.En el primer tubo colocar 4ml de colorante correspondiente que en este caso seria "Azul" sin diluir.

3.Elaborar una bateria de diluciones con un factor de dilucion 1/2.

4.Cuando se haya echo la bateria de diluciones, medir en el espectofotometro.

5.Primero utilizaremos una cubeta para realizar el blanco (Agua destilada), y luego medir las cinco diluciones para averiguar las distintas concentraciones.

Segundo erlenmeyer con cromogeno a una concentracion de 600 mg/dl.

1.Colocamos en una gradilla 4 tubos y los ultimos 3 tubos con 3 ml de agua destilada cada uno.

2.En el primer tubo colocar 1.5 ml de colorante correspondiente que en este caso seria "Rojo" sin diluir.

3.Elaborar una bateria de diluciones con un factor 1/3.

4.Cuando se haya echo la bateria de diluciones, medir en el espectofotometro.

5.Primero utilizaremos una cubeta para realizar el blanco (Agua destilada), y luego medias las 4 diluciones para averiguar las distintas concentraciones.

*Cuando hayamos medidos los dos cromogenos, se realiza la curva de calibracion.

RESULTADOS:

Cromogeno 1:

El color azul es complementario y el naranja es el color absorbido.

Tiene una absorvancia de 618 y una concetracion de 170 mg/dl.

-Absorbancia de los tubos:

1-0.334

2-0.180

3-0.086

4-0.044

5-0.024

Cromogeno 2:

El rojo es el color complementario y el azul-verde es el color absorbido.

Tiene una absorvancia de 500 y una concentracion de 140 mg/dl.

-Absorbancia de los tubos:

1-0.673

2-0.252

3-0.102

4-0.045

OBSERVACIONES:

Para sacar el factor de dilución he realizado la siguiente formula:

                            VP:VP/D-1

La espectofotometria se realizó el dia 22/09/17.
La curva de calibracion se realizó el dia 25/09/17.