PRACTICA 2:CUANTIFICACION DE PROTEINAS EN ORINA CON ACIDO SULFOSALICILICO POR TURBIDIMETRIA.

PRACTICA NUMERO 2

28/09/2017

OBJETIVOS:

Se va a realizar una cuantificacion de proteínas presente en orina con ácido sulfosalicilico por turbidimetria.

UTILIDAD CLÍNICA:

Esta técnica se va a realizar para poder detectar presencia de proteínas en orina a través de turbidimetria mediante un fotometro.

FUNDAMENTOS:

La adicion de acido sulfosalicidico a una solucion de proteinas actua sobre estas, dando lugar a la aparicion de un fino precipitado en suspension. Este precipitado se observa como una turbidez blanquecina cuya intensidad puede ser cuantificada por turbidimetria.

En el metodo de turbidimetria se cuantifica la concentracion de proteinas presentes en una muestra de orina.

APARATAJE:

Fotometro:
Es un aparato que emplean filtros de vidrio o de interferencia y obtienen luz monocromática a longitudes de onda discretas (a saltos).

MATERIALES:

-Tubos de ensayo de 5 y 10 ml.

-Pipetas automaticas.

-Cubeta de fotometria.

-Gradilla.

-Orina.

REACTIVOS:

-Suero salino fisiologico (0.9 mg/dl)

-Acido sulfosalicilico al 3% p/v en agua destilada.

-Patron de proteinas.

-Albumina bovina.

PROCEDIMIENTO:

1.Obtenemos una muestra de orina en un bote con tapa, en el introducimos albumina bovina y proteinas y se realiza una tira reactiva para comprobar que da un resultado positivo para su posterior resultado en el fotometro.

2.Preparar un tubo de 5ml como BR (Blanco reactivo), otro tubo de 5 ml como BM (Blanco muestra), y cuatro tubos de 5ml como P1, P2, P3, P4 (Patrones) y un ultimo tubo de 5 ml como PB (problema).

3.Tambien en otros 4 tubos de 10 ml como D1, D2, D3, D4 con las siguientes disoluciones:

                D1: 0.2 ml de patron + 9.8 ml de SSF.    (140 mg/dl)

                D2: 0.1 ml de patron + 9.9 ml de SSF.    (70 mg/dl)

                D3: 0.05 ml de patron + 9.95 ml de SSF    (35mg/dl)

                D4: 0.025 ml de patron + 9.975 ml de SSF  (17.5mg/dl)

4.Posteriormente se rellenan los tubos BR, P1, P2, P3, P4, BM, PB:
          BR: 0.5ml de Suero + 2 ml de A.sulfosalicilico.
          P1:  0.5 ml de D1 + 2 ml de A.sulfosalicilico.
          P2:  0.5 ml de D2 + 2 ml de A.sulfosalicilico.
          P3:  0.5 ml de D3 + 2 ml de A.sulfosalicilico.
          P4:  0.5 ml de D4 + 2 ml de A.sulfosalicilico.
          BM: 2 ml de Suero + 0.5 ml de Orina.
          PB: 0.5 ml de Orina + 2 ml de A.sulfosalicilico.

5.Agitar los tubos.
6.Utilizar las cubetas de fotometria  para los tubos anteriormente realizados y medir la concentración obtenida.

7.Para realizar la concentracion, marcamos una longitus de onda de 660nm.
8.Primero se ajusta el fotometro con el BR y medimos absorvacia de P1, P2, P3, P4.
9.Por ultimo se vuelve a ajustar el fotometro a cero con el BM y se mide absorbancia de PB.
10.Al realizar la absorbancia del PB nos da un valor fuera de la linealidad por lo que no cumple la ley de Lambert-bert por lo que hay que diluirlo y multiplicarlo por el factor de dilucion.

11.Con los resultados obtenidos realizamos una curva de calibración.

 

RESULTADOS:

BR: 0
P1: 0.482
P2: 0.298
P3: 0.240
P4: 0.185
BM: 0
PB: 0.983
PB2: 0.165

OBSERVACIONES:

*Para la realizacion del acido sulfosalicilico se ha echo una disolucion al 3% p/v en agua destilada.

Se preparan 200ml para toda la clase cogiendo 12 para cada grupo.