PRACTICA 8: SEPARACION DE UNA MEZCLA DE AMINOACIDOS POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

PRACTICA NUMERO 8

25/10/2017

OBJETIVOS:

El objetivo de una practica es realizar una separacion e identificacion de los aminoacidos triptofano, alanina valina y arginina presentes en una muestra mediante una cromatografia de capa fina ascendente.

UTILIDAD CLINICA:

uno de los problemas mas comunes en los estudios o analisis bioquimicos consiste en separar los componentes de una mezcla e identificar dichos componentes.

La cromatografia permite realizar dicha separacion e identificacion.

Uno de los analisis empleados para la deteccion de aminoacidos en una muestra biologica es la cromatografia en capa fina.

FUNDAMENTOS:

Se basa en la separación de aminoácidos en una muestra biológica.

APARATAJE:

-No se utiliza ningún aparato.

MATERIALES:

-Laminas de gel de Celulosa.

-Muestra problema contenido en una mezcla desconocida de aminoácidos.

-Muestras patron de aminoacidos.

-Vaso de precipitado.

-Micropipeta.

-Atomizador.

REACTIVOS:

-Disolvente de cromatografia.

-Disolución reveladora: resuspender ninhidrina en acetona a una concentración de 0.2% p/v.

PROCEDIMIENTO:

1.Coger una placa de gel de celulosa (para manipularla se debe coger con guantes y por los bordes ya que las huellas de los dedos podrian aparecer posteriormente como confusas manchas coloreadas).

2.Con un lapiz muy blando para no dañar el gel, marcar los limites de la placa de aproximadamente 1 centimetro.

3.Con el mismo lapiz marcar dos puntos donde se aplicaran las muestras. Estos puntos deben estar a 1.5 cm de la base y separadas entre si por 1 cm.

4.En uno de los puntos se coloca una gota de aminoacido problema y en el otro punto la muestra. Esta operacion debe hacerse aplicando y secando la misma muestra varias veces para evitar una excesiva superficie del punto de aplicacion.

5.Una vez que las manchas se hayan secado al aire, introducir la placa verticalmente en un vaso de precipitado de forma que las muestras queden en la base del vaso de precipitado.

6.Con una pipeta manual echar el disolver en el vaso de precipitado con cuidado de forma que cubra el fondo hasta una altura maxima de 1 cm y cerrarla.

7.Cuando el solvente haya subido aproximadamente 8 cm, sacar la placa del vaso de precipitado, marcarlo con un lapiz el frente del solvente hasta donde haya llegado la fase movil y secar la placa al aire.

8.Cuando la placa este perfectamente seca, pulverizar con revelador de ninhidrina.

9.Calentar la placa 2 minutos en la estufa a 105ºC, las manchas de los aminoacidos de color rosado apareceran distribuidas a lo largo del gel.

RESULTADOS:

OBSERVACIONES:

La muestra prolema y los patrones se deben conservar congelados a -20ºC.

La solucion de ninhidrina una vez preparada caduca a los 6 meses.