PRACTICA 14: TRIGLICERIDOS
PRACTICA NUMERO 14
20/12/17
OBJETIVOS:
Vamos a realizar la determinación cuantitativa de trigliceridos por pruebas fotometricas
( colorimetricas ).
Vamos a realizar la determinación cuantitativa de trigliceridos por pruebas fotometricas
( colorimetricas ).
UTILIDAD CLÍNICA:
Los trigliceridos son grasas que suministran energia a la celula.
Al igual que el colesterol, son transportados a las celulas del organismo por las lipoproteinas en la sangre.
Una dieta alta en grasas saturadas o carbohidratos puede elevar los niveles de trigliceridos.
Su aumento es relativamente inespecifico. Diversas dolencias, como ciertas disfunciones hepaticas ( cirrosis, hepatitis, obstruccion biliar) o diabetes mellitus pueden estar asociadas con su elevacion.
El diagnostico clinico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clinicos y de laboratorio.
Los trigliceridos son grasas que suministran energia a la celula.
Al igual que el colesterol, son transportados a las celulas del organismo por las lipoproteinas en la sangre.
Una dieta alta en grasas saturadas o carbohidratos puede elevar los niveles de trigliceridos.
Su aumento es relativamente inespecifico. Diversas dolencias, como ciertas disfunciones hepaticas ( cirrosis, hepatitis, obstruccion biliar) o diabetes mellitus pueden estar asociadas con su elevacion.
El diagnostico clinico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clinicos y de laboratorio.
FUNDAMENTOS:
Los trigliceridos incubados con lipoproteinas liberan glicerol y acidos grasos libres. El glicerol es fosforilado por glicerolfosfato deshidrogenasa y ATP en presencia de glicerol quinasa para producir glicerol-3-fosfato y adenosina-5-difosfato y peroxido de hidrogeno.
Al final, el peroxido de hidrogeno reacciona con 4-aminofenazona y p-clorofenol, reaccion catalizada por la peroxidasa dando una coloracion roja.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentracion de trigliceridos presentes en la muestra ensayada.
Los trigliceridos incubados con lipoproteinas liberan glicerol y acidos grasos libres. El glicerol es fosforilado por glicerolfosfato deshidrogenasa y ATP en presencia de glicerol quinasa para producir glicerol-3-fosfato y adenosina-5-difosfato y peroxido de hidrogeno.
Al final, el peroxido de hidrogeno reacciona con 4-aminofenazona y p-clorofenol, reaccion catalizada por la peroxidasa dando una coloracion roja.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentracion de trigliceridos presentes en la muestra ensayada.
APARATAJE:
-Espectrofotometro para realizar la lectura a 505 nm.
-Espectrofotometro para realizar la lectura a 505 nm.
MATERIALES:
-Cubetas.
-Pipetas automáticas y puntas de pipeta.
-Gradilla.
-Suero.
-Cubetas.
-Pipetas automáticas y puntas de pipeta.
-Gradilla.
-Suero.
REACTIVOS:
-R1 (Tampón): GOOD y p-clorofenol.
-R2 (Enzimas):Lipoprotein lipasa, glicerol quinasa, glicerol-3-oxidasa, peroxidasa, 4-aminofenazona y ATP.
-TRIGLICERIDOS CAL: patrón primario acuoso de Trigliceridos.
-R1 (Tampón): GOOD y p-clorofenol.
-R2 (Enzimas):Lipoprotein lipasa, glicerol quinasa, glicerol-3-oxidasa, peroxidasa, 4-aminofenazona y ATP.
-TRIGLICERIDOS CAL: patrón primario acuoso de Trigliceridos.
PROCEDIMIENTO:
-Se prepara el espectrofotometro.
*Longitud de onda a 505nm.
*Cubeta a 1cm paso de luz.
*Temperatura a 37ºC.
-Se prepara el reactivo de trabajo (RT), donde se le disuelve el contenido del vial R2 enzimas en el frasco de R1 Tampon, se tapa y se mezcla suavemente hasta disolver el contenido.
-Se preparan tres cubetas donde se etiqueta con BLANCO, PATRÓN Y MUESTRA.
-A cada cubeta se le pipetea:
BLANCO: 1 ml de RT.
PATRÓN: 1 ml de RT + 10 microlitros de Patron.
MUESTRA: 1 ml de RT + 10 microlitros de Muestra.
-Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC en el baño Maria.
-Leer la absorbancia del PATRON y la MUESTRA frente al BLANCO de reactivo.
-Se prepara el espectrofotometro.
*Longitud de onda a 505nm.
*Cubeta a 1cm paso de luz.
*Temperatura a 37ºC.
-Se prepara el reactivo de trabajo (RT), donde se le disuelve el contenido del vial R2 enzimas en el frasco de R1 Tampon, se tapa y se mezcla suavemente hasta disolver el contenido.
-Se preparan tres cubetas donde se etiqueta con BLANCO, PATRÓN Y MUESTRA.
-A cada cubeta se le pipetea:
BLANCO: 1 ml de RT.
PATRÓN: 1 ml de RT + 10 microlitros de Patron.
MUESTRA: 1 ml de RT + 10 microlitros de Muestra.
-Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC en el baño Maria.
-Leer la absorbancia del PATRON y la MUESTRA frente al BLANCO de reactivo.
RESULTADOS:
-Patrón: 0.333.
-Muestra: 0.098
-Blanco: 0.
Cálculos: (0.098/0.333) x 200 = 58.68 mg/dl de colesterol en la muestra.
*Los valores de referencia son:
MUJER: 35-135 mg/dl.
HOMBRE: 40-160 mg/dl.
Por lo que el resultado que nos ha dado se encuentra entre los valores normales.
-Patrón: 0.333.
-Muestra: 0.098
-Blanco: 0.
Cálculos: (0.098/0.333) x 200 = 58.68 mg/dl de colesterol en la muestra.
*Los valores de referencia son:
MUJER: 35-135 mg/dl.
HOMBRE: 40-160 mg/dl.
Por lo que el resultado que nos ha dado se encuentra entre los valores normales.
OBSERVACIONES:
-La estabilidad del RT es estable durante 6 semanas en nevera a 2-8ºC o 1 semana a 15-25ºC.
Mantenerlo protegido de la luz.
-El color de las cubetas es estable como mínimo 30 minutos.
-La estabilidad del RT es estable durante 6 semanas en nevera a 2-8ºC o 1 semana a 15-25ºC.
Mantenerlo protegido de la luz.
-El color de las cubetas es estable como mínimo 30 minutos.
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