PRACTICA 15: COLESTEROL.
PRACTICA NUMERO 15
20/12/17
OBJETIVOS:
Vamos a realizar la determinación cuantitativa de colesterol por pruebas fotometricas
( colorimetricas ).
Vamos a realizar la determinación cuantitativa de colesterol por pruebas fotometricas
( colorimetricas ).
UTILIDAD CLÍNICA:
El colesterol es una sustancia grasa presente en todas las células del organismo. El hígado produce naturalmente todo el colesterol que necesita para formar las membranas celulares y producir ciertas hormonas.
La determinación del colesterol es uno de las herramientas mas importantes para el diagnostico y clasificación de las lipemias. El aumento del nivel de colesterol es uno de los principales factores de riesgo cardiovascular.
El colesterol es una sustancia grasa presente en todas las células del organismo. El hígado produce naturalmente todo el colesterol que necesita para formar las membranas celulares y producir ciertas hormonas.
La determinación del colesterol es uno de las herramientas mas importantes para el diagnostico y clasificación de las lipemias. El aumento del nivel de colesterol es uno de los principales factores de riesgo cardiovascular.
FUNDAMENTOS:
El colesterol presente en la muestra origina un compuesto coloreado según una determinada reacción.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de colesterol presente en la muestra ensayada.
El colesterol presente en la muestra origina un compuesto coloreado según una determinada reacción.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de colesterol presente en la muestra ensayada.
APARATAJE:
-Espectrofotometro para realizar la lectura a 505 nm.
-Espectrofotometro para realizar la lectura a 505 nm.
MATERIALES:
-Cubetas.
-Pipetas automáticas y puntas de pipeta.
-Gradilla.
-Suero.
-Cubetas.
-Pipetas automáticas y puntas de pipeta.
-Gradilla.
-Suero.
REACTIVOS:
-R1 (Tampón): PIPES y fenol.
-R2 (Enzimas): colesterol esterasa, colesterol oxidasa, peroxidasa y 4-aminofenazona.
-CHOLESTEROL CAL: patrón primario acuoso de colesterol. Contiene Triton X-114.
-R1 (Tampón): PIPES y fenol.
-R2 (Enzimas): colesterol esterasa, colesterol oxidasa, peroxidasa y 4-aminofenazona.
-CHOLESTEROL CAL: patrón primario acuoso de colesterol. Contiene Triton X-114.
PROCEDIMIENTO:
-Se prepara el espectrofotometro.
*Longitud de onda a 505nm.
*Cubeta a 1cm paso de luz.
*Temperatura a 37ºC.
-Se prepara el reactivo de trabajo (RT), donde se le disuelve el contenido del vial R2 enzimas en el frasco de R1 Tampon, se tapa y se mezcla suavemente hasta disolver el contenido.
-Se preparan tres cubetas donde se etiqueta con BLANCO, PATRÓN Y MUESTRA.
-A cada cubeta se le pipetea:
BLANCO: 1 ml de RT.
PATRÓN: 1 ml de RT + 10 microlitros de Patron.
MUESTRA: 1 ml de RT + 10 microlitros de Muestra.
-Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC en el baño Maria.
-Leer la absorbancia del PATRON y la MUESTRA frente al BLANCO de reactivo.
-Se prepara el espectrofotometro.
*Longitud de onda a 505nm.
*Cubeta a 1cm paso de luz.
*Temperatura a 37ºC.
-Se prepara el reactivo de trabajo (RT), donde se le disuelve el contenido del vial R2 enzimas en el frasco de R1 Tampon, se tapa y se mezcla suavemente hasta disolver el contenido.
-Se preparan tres cubetas donde se etiqueta con BLANCO, PATRÓN Y MUESTRA.
-A cada cubeta se le pipetea:
BLANCO: 1 ml de RT.
PATRÓN: 1 ml de RT + 10 microlitros de Patron.
MUESTRA: 1 ml de RT + 10 microlitros de Muestra.
-Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC en el baño Maria.
-Leer la absorbancia del PATRON y la MUESTRA frente al BLANCO de reactivo.
RESULTADOS:
-Patrón: 0.372
-Muestra: 0.243.
-Blanco: 0.
Cálculos: (0.243/0.372) x 200 = 130.64 mg/dl de colesterol en la muestra.
Al ser un resultado inferior a 200 mg/dl da valor normal.
-Patrón: 0.372
-Muestra: 0.243.
-Blanco: 0.
Cálculos: (0.243/0.372) x 200 = 130.64 mg/dl de colesterol en la muestra.
Al ser un resultado inferior a 200 mg/dl da valor normal.
OBSERVACIONES:
-La estabilidad del RT es estable durante 4 meses en nevera a 2-8ºC o 40 días a 15-25ºC.
Mantenerlo protegido de la luz.
-El color de las cubetas es estable como mínimo 60 minutos.
-La estabilidad del RT es estable durante 4 meses en nevera a 2-8ºC o 40 días a 15-25ºC.
Mantenerlo protegido de la luz.
-El color de las cubetas es estable como mínimo 60 minutos.
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