PRACTICA 9: ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS PLASMÁTICAS.

diciembre 05, 2017

PRACTICA 9: ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS PLASMÁTICAS.

PRACTICA NUMERO 9

21/11/2017

OBJETIVOS:

Separación de proteínas mediante electroforesis.

UTILIDAD CLÍNICA:

Se realiza para obtener cinco fracciones correspondientes a diferentes proteínas plasmáticas con carga negativa.

FUNDAMENTOS:

Las proteínas, moléculas anfóteras, en medio básico adquieren una carga global negativa que hace que migren del cátodo al ánodo cuando son sometidas a un proceso electroforetico.

APARATAJE:

Cubeta de electroforesis y alimentador para electroforesis.

MATERIALES:

-Aplicador ( individual, macro o semimicro o multiple).

-Tiras de acetato de celulosa.

-Laminas Mylar.

-Papel de filtro.

REACTIVOS:

-Solucion tampon ( Tris hipurato).

-Colorante rojo Ponceau.

-Decolorante rojo Ponceau ( acido citrico).

-Solucion transparentadora.

-Solucion disolvente ( acido acetico al 80% ).

PROCEDIMIENTO:

1. Preparación del buffer para técnica semimicro, tomar 100 ml de Tris Hipurato y 900 ml de agua destilada a 1:10. ( Se prepara en una probeta).

2.Cuando se haya realizado el tampon añadirlo a una cubeta.

3. También se añade tampon a la cubeta de electroforesis.

4.Se conectan los polos de la cubeta.

5.Se colocan las tiras en el buffer durante 15 minutos.

6. Después de los 15 minutos sacar las tiras y secarlas con el blotting paper para retirar excesos de tampon.

7.Colocar las tiras en el puente y aplicar el suero, colocar las tiras en el puente con la cara absorbente hacia arriba ( el borde cuadrado debe estar en la esquina inferior derecha o en la esquina superior izquierda) Colocar el puente en la cámara de electrofoesis.