PRACTICA 16: UREA-B

PRACTICA NUMERO 16

10/01/2018

OBJETIVOS:

Realizar la determinación cuantitativa de urea.

UTILIDAD CLÍNICA:

La urea es el resultado final del metabolismo de las proteínas, se forma en el hitado a partir de su destrucción.

Puede aparecer la urea elevada en sangre en dietas con exceso de proteínas, enfermedades renales...

El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

FUNDAMENTOS:

La ureasa cataliza la hidrolisis de la urea, presente en la muestra, en amoniaco y anhidrido carbonico.

Los iones amonio reaccionan con salicilato he hipoclorito, en presencia del catalizador nitroprusiato.

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de urea en la muestra ensayada.

APARATAJE:

-Baño Maria.

-Espectrofotometro para lectura a 580 nm.

MATERIALES:

-Pipeta automática y puntas de pipeta.

-Suero (muestra).

-Tubos de ensayo de 3 ml.

REACTIVOS:

-R1 (Tampon): Tampon fosfatos pH 6,7, EDTA, Salicilato sódico, Nitroprusiato sódico.

-R2 (CIONa): Hipoclorito sódico (CIONa), Hidroxido sódico.

-R3 (Enzimas): Ureasa.

-UREA CAL: Patrón primario acuoso de Urea 50mg/dl.

PROCEDIMIENTO:

-Preparar el reactivo de trabajo (RT): disolver el vial R· en el frasco de R1. Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.

-Preparar 3 tubos de ensayo:

           *Blanco: 1 ml de RT.

           *Patrón: 1 ml de Rt, 10 microlitros de Patron.

           *Muestra: 1 ml de RT, 10 microlitros de Muestra.

-Mezclar e incubar 5 minutos a 37 ºC en el baño Maria

-Sacarlos del baño Maria y pipetear en cada tubo:

          *Blanco: 1 ml de R2.

          *Patrón: 1 ml de R2.

          *Muestra: 1 ml de R2.

-Mezclar e incubar 5 minutos a 37 ºC.

-Leer la absorbancia en el espectrofotometro del patrón y de la muestra frente al blanco de reactivo.

RESULTADOS:

Blanco: 0

Patron: 0.363

Muestra: 0.626 

Calculos:           (0.626/0.363) x 50 =86.22 mg/dl de urea en la muestra.

                           Factor de conversion: 86.22 x 0.1665=14.355 mmol/L.

Da un valor elevado, ya que esta fuera de los valores de referencia ( 15 a 45 mg /dl)

OBSERVACIONES:

-Hay que tener extremo cuidado con el R2 ya que puede provocar quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves.

-Hemos tenido que volver al realizar la practica porque al principio nos daba unos valores desorbitados.