PRACTICA 19: BILIRRUBINA TOTAL.

PRACTICA NUMERO 19

18/01/2018

OBJETIVOS:

Realizar la bilirrubina total mediante el método Jendrassik-Grofby.

UTILIDAD CLINICA:

La bilirrubina se origina por degradación del grupo hemo de la hemoglobina, que a su vez aparece en el plasma como consecuencia de la destrucción de los glóbulos rojos en el sistema retículo endotelial.

FUNDAMENTOS:

Casi todas las técnicas de cuantificacion de la bilirrubina se basan en la reacción de Malloy-Evelyn que valora colorimetricamente por la formación de azobilirrubina, de color rojo cereza, cuando a la bilirrubina se le hace reaccionar en determinadas condiciones con el ácido sulfanilico diaztado.

La bilirrubina conjugada, muy polar, reacciona en medio acuoso con el reactivo de diazotacion, por lo que se le llamo directa , pues al poner en contacto el suero y el reactivo aparecía directamente el color. Sin embargo, la bilirrubina libre, poco polar, no da directamente la reacción y es preciso añadir un tercer reactivo -que inicialmente fue el metanol- para que produzca la reacción de diaztocacion con la consiguiente aparición del color, por este motivo se llamo bilirrubina indirecta.

APARATAJE:

Espectrofotometro.

MATERIALES:

• Pipetas y puntas de pipetas.
• Cubetas de espectofotometria.
• Tubos de 5 ml.
• Muestra de Suero.

REACTIVO:

• R1: Bilirrubina total ( Ácido sulfanilico, ácido clorhídrico y dimetilsulfoxido)
• R2: Nitrito de Socio

PROCEDIMIENTO:

1.Preparar dos tubos :

        -Blanco Total: 1.5 ml ( R1) + 100 microlitros ( muestra).

        -Total: 1.5 ml ( R1) + 50 microlitros ( R2) + 100 microlitros ( muestra).

2.Mezclar y esperar 5 minutos a temperatura ambiente.

3.Leer las absorbancias al espectofotometro.

RESULTADO:

Blanco total : 0,017

Total: 0,123

Calculo=  0,123- 0,017 x 22 = 2,33 mg/dl  Bilirrubina total 

OBSERVACIONES:

Las coloraciones de los tubos son estables durante 30 minutos.