PRACTICA 20: BILIRRUBINA DIRECTA

PRACTICA NUMERO 20

18/01/2018

OBJETIVOS:

Realizar la técnica de Bilirrubina directa por el método de Jendrassik-Grofby.

UTILIDAD CLINICA:

La bilirrubina se origina por degradación del grupo hemo de la hemoglobina, que a su vez aparece en el plasma como consecuencia de la destrucción de los glóbulos rojos en el sistema retículo endotelial.

FUNDAMENTOS:

La bilirrubina en presencia de ácido sulfanilico diazotado forma en un medio alcalino un azo-compuesto de color rojo, cuya intensidad es proporcional a la cantidad de bilirrubina total presente en la muestra.

APARATAJE:

Espectofotometro

MATERIALES:

• Pipetas y puntas de pipeta.
• Tubos de 5 ml.
• Cubetas de Espectofotometria.
• Muestra de Suero.

REACTIVOS:

• R1: Bilirrubina Directa ( Acido sulfanilico  y Acido Clorhídrico )
• R2: Nitrito de sodio.

PROCEDIMIENTOS:

1.Preparar dos tubos de ensayo:

        -Blanco Directa: 1.5 ml ( R1) + 100 microlitros ( muestra )

        -Directa: 1.5 ml ( R1) + 50 microlitros ( R2) + 100 microlitros (muestra).

2.Mezclar y esperar 5 minutos a temperatura ambiente.

3.Leer en el espectofotometro.

RESULTADOS:

Blanco directa : 0,047

Directa: 0,142

Calculo: 0,142 - 0,047 x 22 = 2,09 mg/dl bilirrubina directa.

OBSERVACIONES:

La coloración de los tubos es estable durante 30 minutos.