PRACTICA 21 : LDH

PRACTICA NUMERO 21

OBJETIVOS: 

Determinación cuantitativa de lactato deshidrogenasa mediante técnicas cinéticas.

UTILIDAD CLÍNICA:

La lactato deshidrogenasa es una enzima, destribuida por otdo el organismo humano. Las mayores concentraciones de LDH se encuentran en el higado, corazon, riñon, musculo esqueletico y eritrocitos.
El nivel de LDH en suero esta elevado en pacientes con enfermedades del hígado, infartos de miocardio, alteraciones renales y anemias.

FUNDAMENTOS:

La lactato deshidrogenasa cataliza la reducción del piruvato por el NADH.

La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio determinado fotometricamente es proporcional a la concentración catalítica de LDH en la muestra ensayada.

APARATAJE:

Fotómetro.

MATERIALES:

• Pipetas y puntas de pipetas.
• Cubetas.
• Muestra de suero.

REACTIVOS:

• R1: Tampón.
• R2: Substrato.

PROCEDIMIENTO:

1.Preparar el manejo del espectrofotometro para técnicas cinéticas.

2.Pipetear en dos cubetas.

           -25ºC y 30 ºC : 3 ml ( RT) + 100 microlitros ( muestra).

           -37ºC : 3 ml ( RT ) + 50 microlitros ( muestra).

3.Mezclar e incubar a 1 minuto.

4.Leer la absorbancia A inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.

A1: 1,777 A

A2: 1,763 A

A3: 1,748 A

A4: 1,732 A

5.Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto ( AA/ min ).

RESULTADO:

1 - 2 = A; A = 0,014

2 - 3 = B; B = 0,015

3 - 4 = C; C = 0,016

Media = (0,014 + 0,015 + 0,016)/3 = 0,015

Ahora multiplicamos el valor de la media por el FACTOR proporcionado por el protocolo:

0,015 x 9690 = 145,35 U/L

Es un valor que está por debajo de los valores de referencia ( 230-460 UI/L), aunque esta prueba aislada no tiene significación clínica.

OBSERVACIONES:

La presencia de hemolisis interfiere con los resultados.